④薄层色谱法

取胶囊内容物50mg于分液漏斗中，劲骨胶囊及加水10mL消融，成果成份加煤油醚（30～60⁰C）20mL，分说振摇，盐酸静置分层，氨基取下层液过滤，葡萄作为样品溶液；取盐酸氨基葡萄糖比力品10mg，糖含加水5mL消融，量测作为比力品溶液；按样品配方以及工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物50mg，劲骨胶囊及与样品同法制成阴性样品溶液。成果成份

取上述3种溶液各3～5μL，分说分说点于统一硅胶G薄板上，盐酸以正丁醇-乙醇-冰醋酸-水=（4:1:1:2，氨基V:V:V:V）为睁开剂（按睁开剂体积1mL退出1mg茚三酮，葡萄混匀），糖含睁开，掏出，晾干，60⁰C烘箱加热10min，至黑点显色清晰，在日光灯下检视。

（2）白芍提取物分说

取胶囊内容物2g，加乙醇40mL，超声提取20min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加水20mL消融，加水饱以及正丁醇溶液振摇提取2次，每一次20mL，并吞正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇1mL消融，作为样品溶液；取白芍比力提取物1g，加乙醇30mL，与样品同法制成比力提取物溶液；取白芍比力药材0.5g，加乙醇10mL，与样品同法制成比力药材溶液；取芍药苷比力品过多，加乙醇制成1mg/mL溶液，作为比力品溶液；按样品配方以及工艺制成不含白芍及白芍提取物胶囊内容物2g，与样品同法制成阴性样品溶液。

取上述5种溶液各5～10μL分说点于统一硅胶G薄板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2，V:V:V:V）为睁开剂，睁开，掏出，晾干，喷以5%（g/mL）香草醛硫酸溶液，65⁰C烘箱加热10min，至黑点显色清晰，在日光灯下检视。

（3）碳酸钙分说

①稀盐酸反映法

取胶囊内容物0.2g，于10mL试管中，作为样品；取比力品碳酸钙0.1g，于10mL试管中，作为比力品；按样品配方以及工艺制成不含碳酸钙胶囊内容物0.2g，与样品同法制成阴性样品。在上述3支试管中分说滴入稀盐酸试液，审核反映。

②草酸铵试液积淀法

取胶囊内容物2.5g，于坩埚中先炭化，转入600⁰C高温马弗炉中炽灼3～4h，残渣加15mL稀盐酸试液消融，过滤至50mL具塞试管中，加1滴甲基红试液，用氨试液调至黄色，再加数滴稀盐酸试液使呈酸性，作为样品溶液；取碳酸钙比力品0.6g于50mL具塞试管中，加15mL稀盐酸试液消融，与样品同法制成比力品溶液；按样品配方以及工艺制成不含碳酸钙胶囊内容物2.5g，与样品同法制成阴性样品溶液。

在上述3支试管中分说滴加草酸铵试液，审核反映天气以及颜色（稀盐酸、甲基红、氨试液、草酸铵试液参登科国药典四部配制）。

（4）维生素K1分说

取胶囊内容物2g，于三角瓶中，加0.03mol/L盐酸溶液5mL，60⁰C超声提取10min，加无水乙醇30mL，不断超声20min，掏出，放至室温，转移至50mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，作为样品溶液；取维生素K1比力品过多，加无水乙醇消融，制成2μg/mL，作为比力品溶液；按样品配方以及工艺制成不含维生素K1胶囊内容物2g与样品同法制成阴性样品溶液。

将上述3种溶液用0.22μm滤膜过滤，接管高效液相色谱仪测定。

色谱柱C18（4.6妹妹×250妹妹，5μm）；行动相:甲醇100%；检测波长248nm；柱温30⁰C；进样量10μL。

（5）维生素D3分说

取胶囊内容物5g，于具塞试管中，加0.02%（mL/mL）氨水溶液10mL以及无水乙醇25mL，60℃超声提取10min，掏出，放至室温，罗致正己烷10mL于试管中，摇匀，倒入离心管中，3000r/min离心10min，取下层正己烷作为样品溶液；取维生素D3比力品过多，加正己烷消融，制成0.8μg/mL，作为比力品溶液；按样品配方以及工艺制成不含维生素D3胶囊内容物5g，与样品同法制成阴性样品溶液。

将上述3种溶液用0.22μm滤膜过滤，接管高效液相色谱仪测定。

色谱柱:硅胶柱（3.9妹妹×150妹妹，5μm）；行动相:正己烷-环己烷-异丙醇（50:50:0.8，V:V:V）；检测波长265nm:柱温:30℃；进样量:20μL。

（6）盐酸氨基葡萄糖含量测定

详尽称取胶囊内容物20mg，于三角瓶中，先加1mL乙腈使样品湿润散漫，再加过多水超声提取5min，掏出，放至室温，转移至25mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，作为样品溶液；详尽称取盐酸氨基葡萄糖比力品10mg，于25mL容量瓶中，先加1mL乙腈湿润散漫，用水定容至刻度，摇匀，制成400μg/mL比力品溶液。

将上述2种溶液用0.22μm滤膜过滤，接管高效液相色谱仪测定。

色谱柱:C18（4.6妹妹×250妹妹，5μm）；行动相:乙腈-0.4%（mL/mL）磷酸（三乙胺调至pH3.0）（4:96，V:V）；检测波长:95nm；柱温30℃；进样量:10μL。

措施学验证:参照中国药典四部药品质量尺度合成措施验证教育原则妨碍。

三、服从与合成

一、分说盐酸氨基葡萄糖

（1）碱性酒石酸铜反映法

取胶囊内容物200mg，于10mL试管中，加水5mL消融，作为样品溶液；取盐酸氨基葡萄糖比力品0.1mg，与样品同法制成比力品溶液；按样品配方以及工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物200mg，与样品同法制成阴性样品溶液的措施试验后审核，样品以及比力品溶液天生红色Cu₂O积淀，阴性样品溶液则无此反映，如图2所示。化学反映式如下:C₆H₁₂O₆+2Cu²⁺+4OH-=C₆H₁₂O₇+Cu₂O↓（红色）+2H₂O。

（2）硝酸银反映法

制法与碱性酒石酸铜反映法相同，在水消融的3支试管中，退出数滴稀硝酸试液，使呈酸性，滴加硝酸银试液，审核反映颜色，样品以及比力品溶液天生红色絮状AgCl积淀，阴性样品溶液则无此反映，如图3所示。化学反映式如下:HCl+AgNO₃=AgCl↓（红色）+HNO₃。

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